前言 /

NK細(xì)胞療法是一個(gè)很有前途的臨床研究領(lǐng)域，對某些腫瘤患者具有良好的安全性和初步療效。以NK細(xì)胞為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療領(lǐng)域已經(jīng)到了一個(gè)激動人心的關(guān)頭，但也不枉某些機(jī)構(gòu)前置商業(yè)化，搞出一些讓人百思不得其解的概念，在搏人眼球的同時(shí)狠敲吃瓜群眾一筆智商稅。

在交流中，經(jīng)常被一些“新概念“刷新認(rèn)知，昨日筆者在某社群發(fā)現(xiàn)了這篇發(fā)表于今年8月份關(guān)于亞健康人免疫功能正�；�的文章，非常感興趣，虔誠地拜讀和學(xué)習(xí)，發(fā)現(xiàn)這篇文章很有意思，有亮點(diǎn)，但也有明顯的瑕疵，甚至有“夾帶私貨“的嫌疑。

為了讓讀者及社群成員更好地理解這篇文章，以及文中所提到的NKM細(xì)胞概念，本文做了一些梳理和點(diǎn)評。

這篇文章的研究內(nèi)容總體上可以分為3部分：

（1）根據(jù)外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）的PD-1的表達(dá)量來定義50歲以后的“亞健康”狀態(tài)；

（2）混合的免疫細(xì)胞治療腫瘤患者；

（3）混合的免疫細(xì)胞應(yīng)用于亞健康人。

50歲以后的亞健康狀態(tài)的定義

PD-1屬于免疫細(xì)胞表面的抑制性小分子，在腫瘤患者中常常是高表達(dá)，后果就是抑制了免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷。PD-1單抗就是阻斷了PD-1的抑制性信號，相當(dāng)于松了剎車而繼續(xù)踩油門，從而增強(qiáng)了免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的攻擊和殺傷。

基于這個(gè)獲得諾獎(jiǎng)的免疫學(xué)知識，作者利用流式細(xì)胞儀檢測了外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）表達(dá)PD-1的比例。在作者早期的研究中發(fā)現(xiàn)10-20歲的年輕人，其PBMC表達(dá)PD-1的比例只有不到2%。這次檢測年齡大于50歲的95名健康個(gè)體，其PD-1和CTLA-4的表達(dá)情況。20-50歲的健康個(gè)體表示有一點(diǎn)淡淡的憂傷，被忽視了。

「小知識點(diǎn)1」：PBMC，是peripheral blood mononuclear cells的首字母縮寫，中文翻譯為外周血單個(gè)核細(xì)胞，注意不能翻譯為外周血單核細(xì)胞，單核細(xì)胞的英文專業(yè)詞為monocytes。人PBMC主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（比重為1.070左右），還有一些紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞（比重超過1.080），所以可以通過密度梯度離心的方法從外周血獲得PBMC。

「小知識點(diǎn)2」：CTLA-4，和PD-1具有類似的作用，都是作為免疫檢查點(diǎn)起作用并下調(diào)免疫應(yīng)答，起到抑制信號的作用，在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞中組成型表達(dá)。阻斷CTLA-4有利于增強(qiáng)免疫細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷，激活CTLA-4有利于治療自身免疫性疾病。似乎CTLA-4比PD-1更有臨床價(jià)值。

「小知識點(diǎn)3」：CD3表達(dá)于所有種類的T細(xì)胞，所有CD3+T細(xì)胞即表示總T細(xì)胞（pan-T）。

結(jié)果發(fā)現(xiàn)大于50歲的健康個(gè)體的NK細(xì)胞不表達(dá)CTLA-4小分子，而CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞有少部分表達(dá)PD-1，作者并沒有在圖5中給出具體的數(shù)值，即不知道CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞各自表達(dá)PD-1的比例是多少。

論文供圖-來源：參考資料1

「疑問1」：作者在NK細(xì)胞上檢測了CTLA-4的表達(dá)量，為何不在CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞上檢測CTLA-4的表達(dá)量，畢竟CTLA-4的作用和PD-1的類似的，都是抑制性信號分子。CTLA-4和PD-1都是抑制性信號分子，只根據(jù)PD-1來評價(jià)亞健康狀態(tài)，是很不夠科學(xué)性的。

「疑問2」：作者只提供了檢測CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞各自表達(dá)PD-1的表達(dá)量（圖5），尚缺乏PBMC中CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例數(shù)值，那么如何得到表達(dá)PD-1的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞在PBMC中的比例數(shù)值，即CD3+CD4+PD-1+T/PBMC和CD3+CD8+PD-1+T/PBMC的比例數(shù)據(jù)無從得知。

外周血單個(gè)核細(xì)胞中PD-1表達(dá)的“亞健康個(gè)體”的鑒定—來源：參考資料1

從圖6來看，不好理解分布比例（distribution ratio）的含義是什么。從內(nèi)容上來理解，很可能是PD-1表達(dá)量的比例。姑且按照PD-1表達(dá)量的比例來理解吧。

圖6A，PD-1在CD3+T細(xì)胞（總的T細(xì)胞）的表達(dá)量比例還是很低，表達(dá)量超過4%的50歲以上的健康個(gè)體中，只有16個(gè)人，即16/95=16.84%，即作者在圖6中標(biāo)明有16.84%的個(gè)人出現(xiàn)CD3+PD-1+T/PBMC > 4%的情況，其中有9.47%的個(gè)體出現(xiàn)表達(dá)PD-1的CD4+T細(xì)胞占總的CD4+T細(xì)胞（即CD3+CD4+PD-1+T/CD3+CD4+PD-1+T > 10%）超過10%的情況。有37.9%的個(gè)體出現(xiàn)表達(dá)PD-1的CD8+T細(xì)胞占總的CD8+T細(xì)胞（即CD3+CD8+PD-1+T/CD3+CD8+PD-1+T > 10%）超過10%的情況。

「疑問3」：人為設(shè)定4%和10%的科學(xué)根據(jù)在哪里？為何是4%和10%，而不是3%或者8%或其他？這部分?jǐn)?shù)據(jù)內(nèi)容缺少統(tǒng)計(jì)學(xué)的介入和分析，而且樣本量明顯不足，才95個(gè)人，更沒有對年齡進(jìn)行分組檢測和分析。總不能認(rèn)為七八十歲的人和五十多歲的人，都具有一樣的免疫細(xì)胞功能狀態(tài)吧。

混合的免疫細(xì)胞治療腫瘤患者

從圖1A的流程圖來看，PBMC培養(yǎng)為混合免疫細(xì)胞，工藝流程類似CIK或者NK。

NKM的工藝流程—來源：參考資料1

然后作者對這群80%為T細(xì)胞的混合免疫細(xì)胞（只含20%的NK細(xì)胞）定義為“混合的NK細(xì)胞”（mix-NK cells）。這是謎一樣的定義。有觀點(diǎn)認(rèn)為，這是妥妥的營銷型“玩家”的套路。作者也提到NKM是a mixture of immune-cell types，即混合免疫細(xì)胞類型。其實(shí)，個(gè)人認(rèn)為比較科學(xué)的命名為混合免疫細(xì)胞（mixed-immune cells，MIC），或者干脆為CIK。

某社群交流截圖—來源：群主提供

「疑問4」：圖2，這群混合免疫細(xì)胞的細(xì)胞毒性殺傷實(shí)驗(yàn)，對照組選擇沒有經(jīng)過培養(yǎng)刺激的PBMC。利用對照組來表明實(shí)驗(yàn)組的厲害，不選擇常規(guī)的CIK或者NK，選擇最弱雞的PBMC來做對比，這是啥意思？這真的是很魔幻。作者在補(bǔ)充材料里面提到NKM和NK92（即純的NK細(xì)胞）的殺傷力的對比，雖然NKM的殺傷力（細(xì)胞毒性）只有NK92的一般，而且在圖3中作者還證明了從NKM中分離出來的NK細(xì)胞（純的NK細(xì)胞），其殺傷力遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過NKM，但是作者還是很開心的提到NKM的殺傷力比PBMC高出很多很多。既然NKM的殺傷力不如NK，那本篇文章研究NKM的意義何在？

「疑問5」：文章中提到的數(shù)據(jù)是混合免疫細(xì)胞（即作者定義的NKM細(xì)胞）中NK細(xì)胞占20%，但是圖1D的流式數(shù)據(jù)顯示50歲以上的人PBMC中的NK細(xì)胞含量高達(dá)37.67%（一般低于10%），而且圖1G的流式數(shù)據(jù)顯示NKM細(xì)胞中NK至少有90%的含量。這些相互矛盾的數(shù)據(jù)，該相信哪個(gè)？

NKM細(xì)胞的特征—來源：參考資料1

混合免疫細(xì)胞（即作者定義的NKM細(xì)胞）用于腫瘤患者的治療，11名惡性淋巴瘤患者（7名彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者、2名外周T細(xì)胞淋巴瘤患者、1名間變性大細(xì)胞淋巴瘤患者和1名霍奇金淋巴瘤患者），治療過程如下所示。每位患者每次接受靜脈注射（20–30）億的 NKM細(xì)胞，每2周治療一次，最多治療6次。

NKM細(xì)胞潛在的抗腫瘤活性—來源：參考資料1

治療效果匯總表如下。所有患者均較好的耐受，不出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)。其中1例完全緩解和1例病情穩(wěn)定，其他患者的病情改善不明顯，但是生活質(zhì)量大大提高。

NKM細(xì)胞的治療效果—來源：參考資料1

「疑問6」：納入11名患者，經(jīng)過NKM治療后，卻不統(tǒng)計(jì)腫瘤患者的生存期和更多的臨床血液學(xué)和影像學(xué)指標(biāo)，僅僅是治療前淋巴瘤國際預(yù)后評分（IPI）。既然強(qiáng)調(diào)生活質(zhì)量提高，也沒看到有相關(guān)的生活質(zhì)量評分表。

混合的免疫細(xì)胞應(yīng)用于亞健康人

亞健康人群的選擇標(biāo)準(zhǔn)；PBMC中CD3+PD-1+細(xì)胞大于4%，同時(shí)CD3+CD8+PD-1+細(xì)胞大于10%。一共入組了4名亞健康志愿者。

混合免疫細(xì)胞（即作者定義的NKM細(xì)胞）應(yīng)用于亞健康人的方案如下，即每4周回輸一次，連續(xù)3次，每次20億。

在亞健康個(gè)體中使用NKM細(xì)胞療法的潛在免疫正�；�—來源：參考資料1

經(jīng)過治療后，所有的4名亞健康人的表達(dá)PD-1的CD8+T細(xì)胞的比例下降，3名亞健康人的表達(dá)PD-1的CD4+T細(xì)胞的比例下降。然后，作者得出結(jié)論是經(jīng)過NKM治療后，亞健康人的免疫功能恢復(fù)正常了。

「疑問7」：就區(qū)區(qū)4名志愿者，都沒法做統(tǒng)計(jì)分析，就敢下NKM讓免疫功能正�；�的結(jié)論。這是天真還是無知？亞健康人群的定義缺乏科學(xué)證據(jù)，隨意性很強(qiáng)。

小結(jié)和點(diǎn)評

畢竟這篇文章經(jīng)過“評審專家“的評審和同意發(fā)表，所以不能簡單地說這篇文章在胡說八道。文章題目已經(jīng)點(diǎn)題，是利用NKM來讓亞健康人群恢復(fù)免疫正常（免疫正�；�），但是文章中只入組4名亞健康人，反而入組治療了11名腫瘤患者。在文章中的討論部分，作者提到NKM能讓亞健康和腫瘤患者的免疫功能恢復(fù)正常。你信嗎？

更有意思的是，文章中作者自己的數(shù)據(jù)證明自己培養(yǎng)的混合免疫細(xì)胞（即作者定義的NKM細(xì)胞）的殺傷力不如NK（包括NK92和從NKM分離出來的NK），只是比PBMC強(qiáng)，卻還在通篇描述NKM的臨床治療。反正我是看不懂的。